Page 5 - KBM_2_2024

Klin. Biochem. Metab., 32 (53), 2024, No. 2, p. 43 - 48

Detekce monoklonálních volných lehkých řetězců imunoglobuli-
nů metodou izoelektrické fokusace s následným afinitním imuno-

blottingem

Vilímová K. , Kušnierová P. 1, 2
1

1 Ústav laboratorní medicíny, Oddělení klinické biochemie, Fakultní nemocnice Ostrava, Ostrava
2 Ústav laboratorní medicíny, Lékařská fakulta, Ostravská univerzita, Ostrava

SOUHRN

Cíle práce: Cílem práce bylo posouzení základních analytických charakteristik metody (IEF/AIB) k detekci monoklonálních
volných lehkých řetězců (FLC), vzájemné porovnání s rutinně dostupnými metodami a její využití při rozlišení monoklonál-
ního, resp. oligoklonálního charakteru volných lehkých řetězců.
Metodika: Do studie bylo zařazeno celkem 94 vzorků séra a moči pacientů z různých odborných ambulancí Moravsko-
slezského kraje s podezřením na monoklonální gamapatie. K průkazu monoklonální komponenty byla využita elektroforéza
sérových proteinů, imunofixační elektroforéza a IEF/AIF. Ke statistickému zpracování dat byl použit program MS Excel
a MedCalc.
Výsledky: IEF/AIB je vysoce citlivá metoda, jejíž mez kvantifikace se pohybuje okolo 0,025 mg/L pro FLC kappa
a 0,25 mg/L pro FLC lambda, na rozdíl od elektroforézy sérových proteinů a imunofixační elektroforézy. Při posuzování me-
tod na základě shody klinické interpretace bylo 100% shody (κ = 1,0) dosaženo mezi metodami IMF a IEF/AIB pro průkaz
monoklonálních volných lehkých řetězců v séru a 92,6%, resp. 94,4% shody pro průkaz monoklonálních volných lehkých
řetězců kappa, resp. lambda v moči (κ = 0,844, resp. 0,886). Srovnáním výsledků pacientů s prokázaným oligoklonálním
profilem volných lehkých řetězců kappa, resp. lambda metodou IMF s IEF/AIB bylo získáno 75%, resp. 68,8% shody
(κ = 0,215, resp. 0,076), z čehož plyne, že metodou IEF/AIB se podařilo u 25 %, resp. 30,2 % vzorků prokázat monoklo-
nální volné lehké řetězce v séru, které metodou IMF byly chybně interpretovány jako oligoklonální profil.
Závěr: Metoda izoelektrické fokusace s následným afinitním imunoblottingem je vysoce senzitivní metoda umožňující
odhalit přítomný monoklonální imunoglobulin při negativitě elektroforézy sérových proteinů a imunofixační elektroforézy či
rozlišit mezi monoklonálním a oligoklonálním profilem volných lehkých řetězců imunoglobulinů.
Klíčová slova: monoklonální imunoglobulin, oligoklonální profil, elektroforéza sérových proteinů, imunofixační elektroforéza,
izoelektrická fokusace s následným afinitním imunoblottingem.

SUMMARY
Vilímová K., Kušnierová P.: Detection of monoclonal free light chains of immunoglobulins by the method of
isoelectric focusing followed by affinity immunoblotting
Objective: The aim of the study was to assess the basic analytical characteristics of the isoelectric focusing followed by
affinity immunoblotting (IEF/AIB) method for the detection of monoclonal free light chains (FLC), its comparison with routi-
nely available methods and its use in distinguishing monoclonal or oligoclonal character of free light chains.
Methods: A total of 94 serum and urine samples of patients from various specialist outpatient clinics in the Moravian-Sile-
sian Region with suspected monoclonal gammopathy were included in the study. Serum protein electrophoresis, immu-
nofixation electrophoresis and IEF/AIF were used to detect the monoclonal component. MS Excel and MedCalc software
were used for statistical data processing.
Results: The IEF/AIB is a highly sensitive method with a limit of quantification of around 0.025 mg/L for FLC kappa and
0.25 mg/L for FLC lambda, in contrast to serum protein electrophoresis and immunofixation electrophoresis. When asses-
sing the methods on the basis of agreement of clinical interpretation, 100% agreement (κ = 1.0) was achieved between
IMF and IEF/AIB methods for the detection of monoclonal free light chains in serum and 92.6% and 94.4% for the detec-
tion of monoclonal free light chains kappa and lambda in urine (κ = 0.844 respectively 0.886). Comparing the results of
patients with a proven oligoclonal kappa and lambda free light chain profile by IMF with IEF/AIB, 75% respectively 68.8%
agreement was obtained (κ = 0.215 respectively 0.076), indicating that the IEF/AIB method was able to detect monoclonal
serum free light chains in 25 % respectively 30.2 % of samples, which were misinterpreted as oligoclonal profiles by the
IMF method.
Conclusion: The method of isoelectric focusing followed by affinity immunoblotting is a highly sensitive method that can
detect the presence of monoclonal immunoglobulin when serum protein electrophoresis and immunofixation electropho-
resis are negative or distinguish between monoclonal and oligoclonal immunoglobulin free light chain profiles.
Keywords: monoclonal immunoglobulin, oligoclonal profile, serum protein electrophoresis, immunofixation electrophore-
sis, isoelectric focusing followed by affinity immunoblotting.

Klinická biochemie a metabolismus 2/2024 43