Page 6 - KBM_2_2024

Úvod MedCalc Statistical Software a MS Excel. Mez stano-
vitelnosti u dat naměřených pomocí nefelometrie a tur-
Laboratorní diagnostika monoklonálních gamapatií bidimetrie byla stanovena přímým odečtem z kalibrační
zahrnuje mimo jiné elektroforetické a imunofixační me- křivky. Shoda klinické interpretace výsledků elektroforé-
tody sloužící k průkazu, kvantifikaci a typizaci monoklo- zy, imunofixační elektroforézy a izoelektrické fokusace
nálního imunoglobulinu. Tyto metody jsou doplňovány s následným afinitním imunoblottingem byla vyhodno-
o imunonefelometrické či imunoturbidimetrické stano- cena na základě kappa statistiky.
vení koncentrace volných lehkých řetězců imunoglobu-
linů κ (FLC kappa) a volných lehkých řetězců imunoglo- Výsledky
bulinů λ (FLC lambda) a dále o výpočet poměru volných
lehkých řetězců kappa k volným lehkým řetězcům lam- Meze detekce a stanovitelnosti pro jednotlivé meto-
bda, tzv. FLC ratio. Tyto metody umožňují na základě dy jsou uvedeny v Tabulce 1. V případě nefelometric-
rozdílné citlivosti detekovat monoklonální imunoglobulin kého a turbidimetrického stanovení FLC kappa a FLC
v různých stádiích onemocnění a současně jsou využí- lambda byly hodnoty meze stanovitelnosti vypočteny
vány k monitorování úspěšnosti terapie a samozřejmě přímou metodou z kalibrační křivky jednotlivých analytů.
i relapsu choroby [1]. Nicméně se občas setkáme se V případě elektroforézy bílkovin a imunofixace byla mez
vzorky pacientů s negativním nálezem na elektroforeo- detekce stanovena pomocí komerčně dodané kontro-
gramu či imunofixační elektroforéze, ale mírně zvýše- ly Native Human Kappa Light Chain (kat. č. PHP280,
ným poměrem FLC ratio. Zde nastává otázka, zda toto Bio-Rad, spol. sr. o.). V případě této kontroly je nutné
zvýšení souvisí s monoklonální gamapatií nebo s po- vzít v potaz fakt, že tato kontrola na rozdíl od běžných
stižením funkce ledvin, u nichž byly publikovány vyšší (pacientských) vzorků postrádala signál odpovídající
hodnoty FLC ratio. Vysoce citlivou metodou umožňující polyklonálním imunoglobulinům. Meze detekce a sta-
odhalit monoklonální povahu zvláště volných lehkých novitelnosti uváděné výrobci byly zjištěny z příbalových
řetězců imunoglobulinů se jeví izoelektrická fokusace letáků dodaných reagencií.
s následným afinitním imunoblottingem.
Cílem této studie bylo posouzení základních ana- Výsledky porovnání rutinních metod průkazu mono-
lytických charakteristik metody izoelektrické fokusace klonálních imunoglobulinů s vysoce citlivou metodou,
s následným afinitním imunoblottingem (IEF/AIB) izoelektrickou fokusací s následným afinitním imuno-
k detekci monoklonálních volných lehkých řetězců imu- blottingem, jsou uvedeny v Tabulce 2, obr. 1-4. Meto-
noglobulinů, vzájemné porovnání s rutinně dostupný- dou ELFO byl detekován monoklonální imunoglobulin
mi metodami a její využití při rozlišení monoklonálního, pouze u 50 % vzorků séra a 42,6 % vzorků moči. Me-
resp. oligoklonálního charakteru volných lehkých řetěz- todou IEF/AIB byl naopak monoklonální imunoglobulin
ců imunoglobulinů. detekován u 100 % vzorků. Příkladem je obr. 1. V pří-
padě elektroforézy séra pacienta nebyl detekován mo-
Materiál a metody noklonální imunoglobulin. Zároveň citlivější metoda IMF
prokázala volné lehké řetězce lambda. Tyto výsledky

Do studie bylo zařazeno celkem 94 vzorků séra byly potvrzeny metodou IEF/AIB, která rovněž proká-
a moči pacientů z různých odborných ambulancí Mo- zala přítomnost FLC lambda a současně absenci FLC
ravskoslezského kraje. Byly vytvořeny dva soubory pa- kappa. Ve shodě s těmito výsledky je poměr lehkých ře-
cientů. První skupinu tvořili pacienti s podezřením na tězců kappa a lambda (FLC ratio), který je ve prospěch

monoklonální gamapatii nejasného významu (MGUS) FLC lambda.
a mnohočetný myelom (MM), u nichž byly imunofixač- Příkladem, kdy můžeme pozorovat vyšší citlivost
ní elektroforézou v séru či moči detekovány monoklo- metody IEF/AIB oproti ELFO a IMF, je obr. 3. Negativní
nální volné lehké řetězce (FLC kappa či FLC lambda). nález na ELFO moči. Současně byl v rámci IMF nalezen
Druhou skupinu tvořili pacienti s již diagnostikovaným dvojitý gradient v zóně FLC lambda. Metodou IEF/AIB
a léčeným MM, u nichž byl výsledek imunofixač- byla pozorována pozitivita FLC kappa i FLC lambda.
ní elektroforézy uzavřen jako oligoklonální profil. Data Metoda IEF/AIB díky své vyšší citlivosti tak detekovala
byla zpracována se souhlasem etické komise číslo FLC kappa dříve, než metoda ELFO a IMF.
261/2024.
Volné lehké řetězce imunoglobulinů byly detekovány Při využití vysoce citlivé metody IEF/AIB v rozhodo-
s využitím elektroforézy sérových proteinů (Hydragel 30 vání o monoklonálním, resp. oligoklonálním profilu pa-
β1-β2, kat. č. S-4144, SEBIA Czech republic, s. r. o.) cientů byl pozitivní výsledek prokázán u 44 z 96 testo-
a imunofixační elektroforézy (HYDRAGEL 4 IF, kat. č. vaných vzorků, což odpovídá přibližně 46 %. Výsledky
S-4304; SEBIA, Czech republic, s. r. o.) na analyzátoru této analýzy jsou přehledně znázorněny v Tabulce 3.
Hydrasys 2Scan Focusing. IEF/AIF (in house metoda)
byla provedena za použití přístroje EDC Flatbed Pro- Výsledky kvalitativní analýzy byly porovnány na zá-
fessional (Electrophoresis Development and Consul- kladě shody klinické interpretace kappa statistiky. Při
ting, Tübingen, Německo) na polyakrylamidových ge- porovnání výsledků průkazu monoklonálních volných
lech. Afinitní imunoblotting byl realizován tak, jak bylo lehkých řetězců metodami IMF a IEF/AIB bylo dosa-
popsáno dříve [2] (Zeman et al., 2016). ženo 100% shody, tedy výsledky pozitivní na IMF byly
Ke zpracování naměřených dat byl využit program pozitivní i na IEF/AIB, a naopak výsledky negativní na

44 Klinická biochemie a metabolismus 2/2024